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    原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)詳解

    發(fā)布時間: 2022-01-06  點(diǎn)擊次數(shù): 2014次

    (1)原代培養(yǎng)材料的選擇,盡量選取繁殖能力較強(qiáng)的組織,如胚胎、幼小的生物體或者腫瘤組織等。


    (2)要注意無菌操作。其操作要求應(yīng)高于外科手術(shù)


    (3)整個取材操作要迅速,尤其孕鼠浸泡乙醇時間1min左右,不能過長,以確保胚胎細(xì)胞活性。


    (4)運(yùn)用消化法時胰酶溫度應(yīng)低于37℃,濃度只需平時消化細(xì)胞濃度的一半。因?yàn)榇诉^程不像消化培養(yǎng)細(xì)胞時的1~10min,而是至少20min,先消化下來的細(xì)胞在此胰酶消化液中繼續(xù)消化了10min以上。所以胰酶不能作用過強(qiáng),否則這些細(xì)胞易被損傷而不易生存。


    (5)如使用組織塊法,則應(yīng)待組織塊略干燥,能黏附于瓶壁時再使之與培養(yǎng)液接觸,匆使組織塊漂浮起來。如果組織塊沒有黏壁,則細(xì)胞不易生長,即使生長也因沒有貼在瓶壁上,從而因不能觀察到而無法收集到生長的細(xì)胞。


    (6)原代培養(yǎng)操作時,也可以使用未添加血清的DMEM或PBS洗滌子宮、胚胎或組織塊等。


    (7)本實(shí)驗(yàn)也可以使用新生乳鼠做培養(yǎng)材料。此時要將乳鼠浸入75%乙醇2~3min使皮膚充分消毒,由于乳鼠原代培養(yǎng)污染概率更高,故應(yīng)小心操作,避免污染細(xì)菌。乳鼠原代培養(yǎng)細(xì)胞的存活率不及胚胎細(xì)胞培養(yǎng)的成功率。


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